如何制備細胞懸液呢？

    細胞懸液是指single cell suspension。一般就是指把貼壁培養的細胞消化吹打以后形成的懸液，一般會吹打多次，使粘連的細胞都分開。當然，本身是懸浮培養的細胞的話，就不用消化了。

    制備細胞懸液

    （1）用75%酒精棉球消毒超凈工作臺臺面，然后用75%酒精棉球消毒雙手及暴露部位；

    （2）用75%酒精棉球消毒各培養用液的瓶蓋以及培養瓶瓶蓋部位，并在酒精燈外焰上方一過，擰開瓶蓋，將瓶口再在酒精燈外焰上方一過后，擰上瓶蓋，但不要擰緊，以便下步操作；?

    （3）輕輕將細胞培養瓶內舊培養液倒入燒杯中，注意不要讓瓶口碰到燒杯，不要讓液體濺出；

    （4）吸取PE液3ml加入瓶內，加入時注意從側面加入而不能直接沖細胞貼壁處，避免造成細胞脫壁，然后蓋上蓋子，平放輕搖40下，輕輕倒出，要求倒干凈；

    （5）加入0.3ml的0.25%胰蛋白酶液，加入時直沖細胞貼壁處，平放輕搖，使酶液漫過整個瓶底部，一分鐘之內將培養瓶放在倒置顯微鏡臺上進行觀察，可發現細胞質漸漸回縮，細胞間隙增大，細胞慢慢變圓，用手掌拍打瓶底和瓶側，使細胞從瓶壁上脫落下來并分散，呈懸浮狀；

    （6）立即加入5mlMEM+10%小牛血清，用吸管向瓶壁輕輕吹吸幾次，從培養瓶底部一邊開始到另一邊結束，以確保所有底部都被吹到，使細胞全部從瓶壁脫落并形成均勻的細胞懸液；